Setelah berpisah dengan Joker, Harley Quinn (Margot Robbie) bergabung dengan Black Canary (Jurnee Smollett-Bell), Huntress (Mary Elizabeth Winstead) dan Renee Montoya (Rosie Perez) untuk menyelamatkan seorang gadis muda bernama Cassandra Cain (Ella Jay Basco) dari sosok penguasa kejahatan yang dikenal sebagai Black Mask (Ewan McGregor).